细胞培养瓶是一种方形、宽瓶颈的细胞培养容器，是贴壁细胞培养常用的耗材。细胞的生长受到多种因素的影响，其中常见的主要是以下四个方面：

细胞摇瓶是悬浮细胞培养时经常会用到的一种细胞耗材，不同于贴壁细胞，悬浮细胞悬浮在培养液中生长。除了气体环境、PH、渗透压等条件外，摇床转速也会影响到细胞的生长。细胞培养需要适宜的生长环境和生长温度，这需要选择合适的摇床进行辅助。恒温摇床是与细胞摇瓶搭配使用的一种专用设备，培养细胞时摇床需要不停的转动，来为细胞提供气体条件，同时也可以避免细胞沉积而带来的细胞死亡。

在悬浮细胞培养中，细胞摇瓶是常用的一种细胞培养耗材。悬浮细胞的生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长。在实际培养中，我们如何确定加液量的多少呢？细胞摇瓶常见的规格包括125ml、250ml、500ml、1000ml，满足不同规模的细胞培养需求，如125ml与250ml小容量的瓶子主要应用于小规模的试验，而500ml和1000ml规格则用于中的规模的细胞培养试验。这种耗材使用时要借助摇床的震动来降低细胞的抱团率，维持细胞良好的生长状态。

细菌、真菌污染细菌和真菌污染很容易被检测, 因为受到细菌、真菌污染的细胞, 培养过程中细胞培养瓶的培养基会出现肉眼可见的明显特征。细菌污染会导致培养基出现浑浊、颜色改变以及pH值急剧变化, 受污染的贴壁细胞在几天内会逐渐脱壁死亡。真菌污染后的细胞生长速度变慢, 培养基中会漂浮白色

今天富道细胞来跟大家分享一下常见细胞中的HepG2细胞用细胞培养瓶进行培养的情况。该细胞来源于一名15岁的白人少年的肝癌组织。模式染色体数为55，在免疫抑制小鼠中不致瘤。目前尚未证明该细胞中有HBV基因组。它的培养环境分为：ATCC：90% MEM+10% FBS

今天富道细胞来跟大家分享一下细胞工厂中的黑胶虫污染：目前关于它的本质还说法不一，要在高倍镜下才能看到，培养基内有能动的小黑点、高倍镜下可见黑色小虫游走、会穿梭的黑色点状颗粒。黑胶虫污染后会出现细胞状态差、低倍下呈黑色点状、高倍下做布朗运动、培养基不浑浊、与细胞数量成反比。

我们在使用细胞培养瓶进行培养细胞时总会遇到一些特殊情况而养不好细胞，今天富道细胞就来跟大家分享一下细胞培养瓶中细胞生长缓慢应该怎么办。接种量太少。细胞长得太满会有接触抑制，而细胞接种浓度低，也会使细胞生长繁殖较慢。一般情况下，细胞长至80-90%可进行传代，当细胞长得不太满时进行了传代，会使得细胞接种浓度太低，可能导致细胞自分泌的物质浓度减少，造成生细胞生长缓慢。

我们在使用细胞培养瓶进行细胞培养时最怕出现的情况可能就是细胞培养瓶的发现了污染了，今天富道细胞来跟大家分析一下细胞培养瓶培养细胞时的污染情况细胞房要保证干燥整洁，不然很容易染菌。真菌污染后，培养液清亮，培养瓶中出现丝状物，细胞生长变慢，最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。一旦发现真菌污染，可能导致整个培养箱中的细胞受到污染。需要彻底清理打扫培养箱、超净台、水浴锅、细胞房等。

我们在发现细胞培养瓶中出现了污染的原因排查一般都是采用单一变量法，先把每种试剂：基础培养基、FBS、PBS、完全培养基、不加双抗的完全培养基和冻存液吸取少量到6孔板，放在培养箱过夜/2天（因为4℃冰箱温度低不利于细菌的生长，拿来涂片不易找得到。如果肉眼和显微镜看不到细菌污染也不能排除污染，因为细菌会依附在细胞上，空培没有细胞，细菌又很小很难看到，所以最长可放置7天，若7天后还没有污染迹象就可以排除！）。

我们在使用细胞工厂等细胞培养耗材进行细胞培养时，如果出现细胞污染的情况下，我们这段时间的努力可能都会白费。那我们如何分辨这些污染的情况呢？今天富道细胞就跟大家分享一下。

我们之前介绍了细胞工厂培养细胞时常见的污染，今天富道细胞就来跟大家说一下细胞工厂预防细胞污染及补救方法。我们应对细胞工厂内出现污染最好对策是预防，这一点是毋庸置疑的。所以我们在培养时细胞要勤快，平时所用到的一次性耗材不可重复使用，使用辅助的器皿等要及时高压灭菌，灭菌后超过一周未使用也应重新灭菌。

我们在使用细胞工厂等细胞培养耗材培养细胞时都有可能会发现细胞污染富道细胞总结了一些常见细胞工厂的分类它们分别为：细菌污染、真菌污染、霉菌污染，支原体污染。细菌污染一般是芽孢杆菌、葡萄球菌造成的，污染的主要特征为细胞工厂等细胞培养耗材中培养基变黄、浑浊，低倍镜下呈沙粒状布满细胞间隙或培养基，高倍镜下可见杆状或球状的细菌在培养基中游动（与细胞碎片的布朗运动明显不同）。需注意的是，在污染初期，细菌常成群存在，不一定会有明显的运动，此时需引起警惕。

我们立即弃去细胞培养瓶中的培养基，以PBS润洗2~3次，加入胰酶处理至细胞形态略有改变但未脱离容器时弃去胰酶，加入PBS轻轻润洗1遍； 在细胞培养瓶中加入20×双抗，浸泡细胞3~5min，弃去双抗，并加入新鲜的完全培养基（含10×双抗）培养12h；12h弃去培养基以PBS润洗2~3遍后加入完全培养基（含10×双抗），传代时以较小转速离心（如平时以1000r/min离心，则可降为800~900r/min离心），仍以含10×双抗的培养基培养。

我们在使用细胞摇瓶培养一些悬浮细胞抱团生长是正常现象，大部分悬浮细胞在细胞密度很高的情况下，很可能会出现部分细胞抱团生长的现象，聚团细胞很容易死亡并演化成絮状物，殃及周围的悬浮细胞，因此在培养悬浮细胞时需控制好细胞密度。

我们是使用细胞工厂这种大规模细胞培养耗材时是进行的贴壁细胞培养，那么如果出现贴壁细胞不贴壁了我们该怎么做呢？今天富道细胞来跟大家分享一下细胞工厂培养细胞时不贴壁的六种解决方案：

我们在使用细胞工厂时对生长到一定程度的细胞就到了收获的时候了，这时候就需要借助胰酶对细胞工厂上的细胞进行消化后再收获一般使用trypsin-EDTA 浓度为 0.25％ trypsin-0.53 mM EDTA.2Na 或0.05％trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。首先我们先介绍一下胰酶：胰酶储存的环境一般在–20°C左右，我们在解冻胰酶的普遍是在 4°C 的环境中进行，我们在第一次开瓶后应立即将胰酶少量分装于无菌试管中，并保存于 –20°C环境中，这种操作是将反复冷冻解冻造成