细胞工厂是大规模细胞培养的利器，规范操作是成功的关键。在疫苗研发、单克隆抗体制备及生物制药等工业规模生产领域，细胞工厂已成为不可或缺的核心工具。它通过在有限空间内创造多层培养表面，实现了细胞培养的线性放大，但其优势的充分发挥依赖于严格遵循规范化的操作流程。

培养基与细胞的预处理是成功培养的第一步。提前将细胞工厂和培养基预热至培养温度（通常为37℃），因为大型培养器要达到设定温度需要较长时间，预热可显著加快细胞贴壁速度并提高细胞回收率。在操作环境方面，所有工作都应在超净工作台或生物安全柜内进行，确保无菌环境。操作人员需穿戴适当的个人防护装备，包括实验服、手套和口罩。仔细检查细胞工厂包装是否完好，产品有无破损。检查细胞工厂的规格和类型是否符合实验要求，常见的规格有1层、2层、5层、10层乃至40层，根据培养规模选择合适的型号。

细胞工厂

对于不带管路系统的常规细胞工厂，其标准化操作如下：    
   将准备好的培养基倒入细胞工厂，建议每层加入150-200mL培养基。接着将细胞工厂侧放，使液面平衡，液口朝上，静置一段时间让培养液平均分配到每一层。最后缓慢将细胞工厂放至水平位置，放入细胞培养箱中孵育培养。带管路细胞工厂的操作方法对于带有管路系统的细胞工厂，操作流程更为精细：首先剪掉进液管路上的轧带，根据需求在进液管路上加上管夹。将进液管路末端和储液瓶的出液管路通过无菌接管机进行连接。加入细胞悬液后，关闭进液管路上的管夹，利用重力虹吸原理或蠕动泵将培养基或细胞悬液加入到细胞工厂中。关键操作要点：将细胞工厂侧放，使液面平均分配到每层，进液管路侧朝下，空气滤器侧朝上，避免液体进入空气滤器中。顺时针旋转90℃，使加液口朝上，静置后液体平均分配到每一层。缓慢将细胞工厂放至水平位置，整理好进液管路，然后放入培养箱。接种细胞时，将适量的细胞悬液通过专用接口缓慢加入细胞工厂各层，确保细胞均匀分布。可使用蠕动泵等设备辅助接种，提高接种的准确性与效率。接种完成后，及时旋紧盖子，避免外界污染。

10层细胞工厂

温度稳定性是细胞培养成功的基础,培养过程中需确保培养箱温度恒定在37℃（根据细胞类型调整），一点偏差都可能影响细胞收获率。气体交换同样重要。若使用透气盖，确保其处于良好的透气状态；若使用密封盖，在放入CO2培养箱时应适当松开盖子，以保证气体交换。定期观察细胞生长状态是必不可少的环节。可通过透明的培养器壁进行初步观察，但对于10层细胞工厂或40层细胞工厂，由于不能清晰观察中间层的细胞状态，建议使用专用的多层细胞培养器观察台，或参照完全相同培养条件下的培养瓶或单层细胞工厂的状态进行评估。

当细胞生长达到预期阶段，按照以下步骤进行细胞收获：

培养结束后先将培养液倒出，使用无钙无镁磷酸盐缓冲液（CMF-PBS）清洗（每层40-50 mL），若有需要可重复清洗一次。使用预热的消化液（每层10-40 mL）进行消化，平均分布到每层，轻轻前后左右倾斜培养器，确保消化液完全浸过培养面。收集细胞时，以1000 rpm离心5分钟，去除消化液，获得细胞沉淀。用CMF-PBS或培养基清洗消化过的培养器，确保完全回收细胞。

培养基瓶

避免气泡产生是操作中的重要环节。气泡可能导致培养基从上层流到下层，因此操作应缓慢，避免大幅晃动。防止污染是关键要求。所有操作必须严格遵循无菌操作规范，避免手直接接触细胞培养器皿和试剂。操作前后应对手部进行消毒处理。酒精使用需谨慎。避免酒精喷洒到透气盖上，酒精可能会湿润疏水滤膜，导致不能透气影响气体交换或导致操作时不能平衡压力。培养基分配均匀性对细胞生长一致性至关重要。移动细胞工厂时要尽量保持水平，否则会造成每层溶液不均匀。放置细胞工厂的平台或架子一定要水平，防止同层的细胞溶液厚度不同。

细胞工厂管路系统

细胞工厂技术在疫苗行业应用广泛，如甲肝疫苗、口服脊髓灰质炎灭活疫苗等生产已成熟运用这一技术。由于其便捷安全的操作方式，较少的占用空间，可控性好，细胞工厂已被越来越多的生物制药企业和科研机构接受。随着细胞与基因治疗、干细胞研究等前沿领域的快速发展，细胞工厂的价值将进一步凸显。正确规范地操作细胞工厂，不仅能保证实验结果的准确性和可重复性，也能大大提高实验效率，降低科研成本。严谨执行每一步操作，细心关注每一个细节，才能让细胞工厂这一高效工具发挥最大价值，推动生命科学研究和生物制药产业向前发展。